細胞培育室設計方案
組織細胞培養技術與其他一般實驗室工作的主要區別在于要求保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。
一.細胞培養實驗室包括:無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。
1.無菌操作區
(1)無菌操作室應劃為三部分:更衣室、緩沖間、無菌操作間無菌操作間專用于無菌操作、細胞培養。其大小要適當,且其頂部不宜過高(不超過2.5m)以保證紫外線的有效滅菌效果;無菌操作間的空氣消毒:紫外線燈產生臭氧,并且室內溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康??諝膺^濾的恒溫恒濕裝置。
(2)凈化工作臺:操作簡單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細胞培養室使用的凈化工作臺主要有兩種:a)側流式或稱垂直式 b)外流式或稱水平層流式。
2.孵育區本區對無菌的要求雖不比無菌區嚴格,但仍需清潔無塵,因此也應設置在干擾少而非來往穿行的區域。
3.制備區在該區主要進行培養液及有關培養用的液體等的制備。
4.儲藏區主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養液、培養瓶等,此環境也需要清潔無塵。
5.清洗和消毒滅菌區清潔和消毒滅菌區應與其他區域分開,主要進行所有細胞培養器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作。
(二)細胞培養實驗室的設備
a)顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細胞培養室所必需的日常工作常規使用設備之一,便于掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等。若有條件,尚可配置帶有照相系統的高質量相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統或縮時電影拍攝裝置等,以便隨時觀察、記錄、攝影細胞生長情況。
b)CO2培養箱——目前多數的細胞培養室已廣泛使用。CO2培養箱的優點是能夠提供進行細胞培養時所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易于使培養液的pH保持穩定,適用于開放或半開放培養。
c)水純化裝置:細胞培養對水的質量要求較高,細胞培養以及與細胞培養工作相關的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。目前國內使用較多的是自動雙重純水蒸餾器(石英管加熱),使用方便,安全、蒸餾速度快(1600ml/h)。
d)冰箱:細胞培養室必須配備
e)細胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮罐。
f)離心機:一般可常規配置4000rpm的國產臺式離心機,例如細胞沉降,使用80~100g的離心機即可,離心力過大有時可能引起細胞的損傷。
g)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
h)濾器:多采用濾過消毒以除去細菌。
i)培養用器皿耗材:培養瓶、培養皿:、多孔培養板、貯液瓶、吸管、加樣器等
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